一、原理 ?? 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測豬尿、**、飼料中的沙丁胺醇，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免*化學(xué)反應(yīng)的原理來進行的，樣本中的沙丁胺醇和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗沙丁胺醇抗體，再加入酶標(biāo)二抗，用TMB底物顯色，樣品中的沙丁胺醇含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出沙丁胺醇含量。 ? 二 、試劑盒技術(shù)指標(biāo) 試劑盒靈敏度：0.1 ppb 檢測下限 **樣本（雞肉/肝、豬肉/肝）? ???? 1.0 ppb 豬尿??????????????? ????????????? 0.1 ppb 交叉反應(yīng)率 沙丁胺醇（Salbutamal）????????????? 100％? 克倫特羅（Clenbuterol ）??????????? ?10％? 萊克多巴胺（Ractopamine）???????? < 0.1％? 腎上腺素（Adrenalin）????????????? < 0.1％? 去甲腎上腺素（Noradrenalin）?????? < 0.1％? 異丙腎上腺素（Isoporterenol）?????? < 0.1％?? 樣本回收率 **樣本（雞肉/肝、豬肉/肝）?????? 90±20％ 豬尿???????????????????????????? 100±20％ ? 三、試劑盒 組 成 1. 酶標(biāo)板：??????????? 96T/8孔 2. 標(biāo)準(zhǔn)品液:：  0 ppb、0.1 ppb、0.4 ppb、1.6 ppb、6.4 ppb、25.6 ppb（1mL/瓶） 3. 抗體工作液????????? 1瓶（7 mL） 4. 酶標(biāo)記物：????????? 1瓶（12 mL） 5. 底物緩沖液：??????? 1瓶（7 mL） 6. 底物液： ?????????? 1瓶（7 mL） 7. 終止液：??????????? 1瓶（7 mL） 8. 20倍濃縮洗滌液：? ? 1瓶（50 mL）????? 加蒸餾水稀釋到1000 mL 9. 樣品稀釋液：??????? 1瓶（12 mL）????? 用于稀釋尿樣 ? 四. 樣品處理 尿樣：（稀釋倍數(shù)為2） 先加入25μL樣品稀釋液，再加入25μL尿樣到微孔板中，混合均勻。渾濁尿樣以4000 rpm離心5 min，取上清（清亮部分）。 豬肝、豬肉等** ??前處理配制的溶液 配液1：0.5M鹽酸溶液 ?????????量取41.5ml濃鹽酸加入去離子水定容到1000 ml 配液2：8％氯化鈉溶液 ???????? 稱取80.0g氯化鈉，加1000ml去離子水溶解混勻 配液3：提取液 ???????配液1：配液2=1：4比例混合 配液4：1M氫氧化鈉溶液 ??????? 稱取20.0g氫氧化鈉 1．?? 稱2±0.05 g**放入15ml的離心管中，加入6 mL 提取液，充分搖勻后放置5-10 min； 2．?? 室溫4000 r/min 以上離心5 min； 3．?? 移取1ml 上清液到2ml離心管中，加入45μL配液4溶液，混勻，調(diào)整PH值7-8。 4.? 取50μL下層進行分析。 樣本稀釋倍數(shù)：4 ? 飼料（稀釋倍數(shù)10） 1．用研缽研碎飼料，稱1 g研碎的飼料樣品加入10 mL 0.01 M的鹽酸，充分混合5 min。2．檢查pH值是否在6.5-8之間，否則用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)。 3．3500 rpm離心5 min，轉(zhuǎn)移出上清液（如上清液仍然渾濁可提高轉(zhuǎn)速或用濾紙過濾）。4．吸取50μL進行檢測。 ? ? 五、操作步驟 1． 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。 3． 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50 μL /孔，然后加入抗體工作液50 μL /孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，37 ℃反應(yīng)30 min。 4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。 5．加入酶標(biāo)記物100 μL /孔，用封板膜蓋板，37 ℃反應(yīng)20 min。 6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。 7． 顯色：每孔加入底物緩沖液50 μL，再加底物液50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃環(huán)境避光顯色10 min。 8． 測定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處（在20 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值。 ? 六、結(jié)果判定 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/mL）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁醇實際濃度。 ? 七、注意事項 1. 終止液為2 M**，避免接觸皮膚。 2. 不要使用已過有效日期的孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用，以免降低靈敏度。 3. 0標(biāo)準(zhǔn)液的A450nm<0.6時，表示試劑可能變質(zhì)，請勿使用。 4. 顯色劑變藍(lán)，表明已變質(zhì)，請勿使用。 ? 八、儲藏條件和保質(zhì)期 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒