一、用途 萊克多巴胺屬β-受體激動(dòng)劑類**，人體食入易出現(xiàn)毒副作用，因此許多**都將其列為違禁**。**衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部、**監(jiān)督管理局發(fā)出的公告明確禁止萊克多巴胺在食用動(dòng)物中使用。 HPLC或GC-MS一直用作檢測(cè)β-**的方法，但是其前處理步驟繁瑣，費(fèi)用昂貴。酶聯(lián)免*檢測(cè)試劑盒則可經(jīng)濟(jì)、快速地檢測(cè)尿，肌肉，肝臟及飼料中的萊克多巴胺。本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)酶標(biāo)免*法定量測(cè)定尿樣、肝臟、水、飼料和肌肉中的萊克多巴胺。 ? 二、測(cè)定原理 萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒是利用免*學(xué)直接競(jìng)爭(zhēng)法的原理，固相載體微孔板上包被有萊克多巴胺蛋白偶聯(lián)物，加入待測(cè)萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液及萊克多巴胺的酶標(biāo)記物抗體，包被在微孔板上的萊克多巴胺蛋白偶聯(lián)物和標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的萊克多巴胺競(jìng)爭(zhēng)性地與酶標(biāo)記物抗體結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物；洗滌后加入顯色劑，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物；加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色；在450 nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，樣品中的萊克多巴胺濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。 ? 三、試劑盒組成 （1）96孔酶標(biāo)板：?? 1塊 96T/8孔。 （2）標(biāo)準(zhǔn)品：????? 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1mL/瓶） （3） 酶標(biāo)記物：?????? 1瓶（7 mL）。 （4）底物緩沖液：????? 1瓶（7 mL）。 （5）底物液：????????? 1瓶（7 mL）。 （6）終止液：????????? 1瓶（7 mL）。 （7）20倍濃縮洗滌液：? 1瓶（50 mL）， 加蒸餾水稀釋到1000 mL? 。 （8）使用說(shuō)明書(shū)??????? 1 份 （9）封板膜：??????? ? 2 張 （10）封口袋：???????? 1 個(gè) ? 四、技術(shù)參數(shù) 靈敏度：0.1 ppb 半**濃度（IC50）：≤1.0 ppb 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：0.1-8.1 ppb? 精確度：板內(nèi)變異誤差小于10％，板間變異誤差小于15％ 準(zhǔn)確性（回收率）：尿液、**、飼料：100±20％ ? ? 五、 交叉反應(yīng)活性： Analytes??????? ?????????? ???????????????????? ? Cross-reactivity Ractopamine????????????????????????????? ???? 100.0 Ractopamine Gluc.A ?????????? ?????? ????? 1.0 Ractopamine Gluc B???????????? ????? ?? ?? 5.8? Ractopamine Gluc C???????????????????? ??? 387.0 (1S,3S) ?Ractopamine??????????????????  1.9 (1R,3S)-Ractopamine?????????????????? ??? 0.9 (1S,3R)-ractopamine??????????????????? ?? 98.5 (1R,3R)-ractopamine????????????????? ???? 451.7 Dobutamine????????????????????????? ??????? ?? 0.1 Ritodrine?????????????????????????????????? ????? 2.4 Isoxsuprine??????????????????????????????? ???? 0.1 Salmeterol?????????????????????????????????? ??? 0.1 Fenoterol???????????????????????????????????? ? ? 0.1 Clenbuterol???????????????????????????????? ?<0.01 Salbutamol???????????????????????????????????<0.01 ? 六、樣品處理 1．尿樣?（稀釋倍數(shù)為1） 取50 μL尿樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。渾濁尿樣以4000 r/min離心5分鐘，取上清（清亮部分）。  2．**?（稀釋倍數(shù)為1） a． 取2g±0.05 g**，加入6 mL乙腈-0.1 M HCl（V乙腈：VHCl=84：16），振蕩10 min,室溫4000 r/min以上離心10 min。 b． 取上清3 mL，加入2 mL 0.1M NaOH，加入6 mL乙酸乙酯，振蕩10 min，室溫4000 r/min以上離心10 min。取全部上清于50 ℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈伞?C． 加入1 mL雙蒸水復(fù)溶，取50 μL進(jìn)行分析。 3．?飼料（稀釋倍數(shù)10）： 用研缽研碎飼料，稱1 g研碎的飼料樣品加入2 mL的0.01 M的PBS，渦旋5分鐘。用20000 rpm離心5分鐘，轉(zhuǎn)移出上清液。吸取10 μL加入40 μL0.01 M的PBS中進(jìn)行檢測(cè)。 ? 七、 操作步驟 1． 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡田30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。 3．加入50 μL樣品或標(biāo)準(zhǔn)品到微孔板中，再加入50 μL酶標(biāo)記物到微孔板中，充分振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，室溫下反應(yīng)30 min（或37℃下反應(yīng)20 min）。 4． 棄去孔中液體，每孔注滿稀釋好的濃縮稀釋液，輕輕振蕩，棄去孔中液體，并在吸水紙上拍干，重復(fù)6次。 5．加入50 μL底物液緩沖液，再加入50 μL底物液，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，在室溫（或37℃）暗處孵育10 min。 6．加入50 μL終止液到微孔板中，混合好在450 nm處測(cè)量吸光度值，必須在加入終止液后20 min內(nèi)讀取光度值。 ? 八、 注意事項(xiàng)?? 1．使用之前將所有試劑回升至室溫，使用之后立即將所有試劑放回2-8 ℃。在EIA分析中的重復(fù)性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細(xì)按照推薦的洗板順序操作是EIA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。 2．終止液為2M**，避免接觸皮膚。 3．不要使用過(guò)了有效日期的萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒，不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用，以免降低靈敏度。 4．0標(biāo)準(zhǔn)品的OD值小于0.5時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)，請(qǐng)勿使用。 5．顯色劑變藍(lán)，表明已變質(zhì)，請(qǐng)勿使用。 ? 九、儲(chǔ)存條件 1． 2-8℃保存，切勿冷凍。 2． 將不用的酶標(biāo)板放進(jìn)帶干燥劑的封口袋中密封保存。 3． 酶標(biāo)記物和顯色液對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。