一、原理 本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物恩諾沙星和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗恩諾沙星酶標抗體，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物恩諾沙星的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物恩諾沙星的含量。 ? 二 、試劑盒技術指標 試劑盒靈敏度：0.1 ppb 檢測下限 **樣本（雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚）? ?? 1 ppb 血清樣本 ?????????????????????????????? 1 ppb 蜂蜜樣本????????????? ????????????????? 2 ppb 交叉反應率 恩諾沙星???????????????????????????????? 100％ 環(huán)丙沙星???????????????????????????????? 1.25％ 諾氟沙星???????????????????????????????? 1.65％ 其它沙星類**交叉反應率均小于0.1％ 樣本回收率 ?? ?**樣本（雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚）???? 100±20％ ?? ?血清樣本??????????????????????? ??????? 100±20％ ?? ?蜂蜜樣本???????????????????????????????  90±15％ ? 三、試劑盒 組 成 1．微量測試孔：? 96孔，12條 2．標 準 液×6瓶： （1mL/瓶） 0 ppb、 0.1 ppb、0.3 ppb、 0.9 ppb、 2.7 ppb、 8.1 ppb 3．酶標記物????????????????? 7 mL 4．底物緩沖液??????????????? 7 mL? 5．底物液　????????????????? 7 mL? 6．終止液??????????????????? 7 mL 7．20倍濃縮洗滌液?????????? 50 mL ????加蒸餾水后稀釋到1000 mL。 9．復溶液????????????????? ? 50 mL ? 四、樣本前處理步驟 ??樣本處理前須知： 1．實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。 2．實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。 ? 1.?動物**樣本（雞肉，魚肉，蝦肉，豬肉）） ??  1．魚蝦去皮取肉，用勻漿器均質樣品； 2．稱1.0 g 均質過的**樣本于50 mL離心管中； 3．加入含5％甲醇的復溶液2 ml，震蕩10 min； 4．5000 r/min以上離心10 min（如果上清液太渾濁需取出 2-4mL再次離心）； 5．取上清液，用復溶液稀釋5倍。震蕩均勻。 6．取50 μL用于分析。 樣本稀釋倍數：15 2?液態(tài)奶 稱取樣品5 mL，于10000 r/min離心10 min。撥去上層油脂，取上清液，用復溶液稀釋15倍。 震蕩均勻。取50 uL待測。 稀釋倍數15倍。 3?酸奶 稱取樣品5 g，于10000 r/min離心1 0min。取上清，用復溶液稀釋15倍。加入等量正己烷，輕輕混勻。5000 r/min離心10 min。去除上層正己烷，取下層清液50 uL待測。 稀釋倍數15倍。 4?肝臟 用勻漿器均質樣品，稱取樣品1 g，加入復溶液3 mL，震蕩10 min。沸水浴10 min。5000 r/min離心10 min。取上清，用復溶液稀釋5倍。震蕩均勻。取50 uL待測。 稀釋倍數20倍。 5.?蜂蜜 1．取1 g蜂蜜，加入2 mL 0.02 M PB緩沖液，振蕩至蜂蜜全部溶解； 2．加入8 mL二氯甲烷，振蕩5 min，4000 r/min以上離心5 min； 3．輕吸掉上層，取下層有機相至干燥溶器中，50 ℃氮氣吹干/旋轉蒸發(fā)至干； 4． 用1 mL復溶液溶解干燥的殘留物，再用復溶液將其按1：3稀釋；? 5．取50 μL用于分析。 ?? 樣本稀釋倍數：4 ? 五、操作步驟： 1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫平衡30 min以上, 注意?? 每種液體試劑使用前均須搖勻。 2．按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。 3．加標準品/樣本50 μL /孔，然后加入酶標液50 μL /孔，再振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，37℃環(huán)境反應30 min(室溫下反應40 min)。 4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。 5．顯色：每孔加入底物緩沖液50 μL，再加底物液50 μL，輕輕振蕩混勻，室溫或37℃環(huán)境避光顯色10 min。 6．測定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩勻，設定酶標儀于450 nm處（在20min內讀完數據），測定吸光度值。 ? 六、結果判定 以標準品百分吸光率為縱坐標，以恩諾沙星標準品濃度（ng/mL）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中恩諾沙星的實際濃度。 ? 七、注意事項 1．終止液為2M**，避免接觸皮膚。 2．不要使用已過有效日期的檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。 3．0標準液的OD值小于0.6時，表示試劑可能變質，請勿使用。 4. 顯色劑變藍，表明已變質，請勿使用。 ? 八、儲藏條件和保質期 儲藏條件：試劑盒于2-8 ?℃?保存，不要冷凍。 保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。